1、溶剂系统的选择与配置
根据样品极性,采用分析型薄层色谱筛选合适的溶剂体系(如正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水)。将选定溶剂按比例混合并静置分层,使用超声脱气15分钟,避免气泡进入分离柱。
2、管路连接与螺旋管填充
将聚四氟乙烯螺旋管紧密缠绕在离心鼓上,确保无松脱。启动“填充模式”,以10mL/min流速将固定相注入螺旋管,直至出口流出液体,记录注入体积。
3、转速与流速参数设定
设置分离柱转速为800-1200rpm,调节流动相流速为1-3mL/min,同时开启恒温循环水浴(25℃)。待系统压力稳定且基线平直后,方可进行下一步操作。
4、样品进样与馏分收集
使用进样阀将样品溶液推入管路,切换至“洗脱模式”。根据检测器信号(如紫外波长254nm)手动或自动收集目标馏分,每管收集时间可设为1-2分钟。
5、分离后系统清洗
结束后先停止流动相,再缓慢降低转速至0。使用正丁醇或乙醇冲洗管路残留溶剂,最后用氮气吹干螺旋管内部,防止密封圈粘连。
高速逆流色谱仪
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